مشاهده باکتری ها زیر میکروسکوپ اهداف مختلفی دارند که عبارتند از : شناسایی، تشخیص،طبقه بندی و مشاهده شکل باکتری ها
به طور کلی مشاهده باکتری ها به دو صورت ممکن است ۱- زنده ۲- رنگ آمیزی شده
مشاهده باکتری ها به صورت زنده :
این روش دارای یکسری ایراداتی است از جمله اینکه در این روش خطر احتمالی گسترش و پخش شدن باکتری در فضای آزمایشگاهی وجود دارد همچنین باکتری زنده تقریبا بی رنگ است و دارای تضاد کافی با محیط مایع اطرافش نیست
مشاهده باکتری به صورت رنگ آمیزی شده :
به طور کلی مواد رنگی املاحی هستند که یون های آن رنگی است و به عبارتی یک نمک ترکیبی است که از یونی با بار مثبت و یونی دیگر با بار منفی تشکیل شده است
مواد رنگی را میتوان به دو دسته اسیدی و قلیایی تقسیم کرد اگر قسمت رنگی در یون مثبت باشد رنگ قلیایی است در غیر این صورت رنگ اسیدی است
سلول باکتری هنگامی که در محیطی قرار میگیرد که PH خنثی دارد دارای بار میشوند آنهایی که بار منفی دارند میل ترکیبی شدیدی با بار مثبت دارند فلذا با جز رنگ دار در رنگ های قلیایی ترکیب شده و سلول رنگ میشود
روش های رنگ آمیزی بسته به انواع باکتری ها و هدف از مشاهده باکتری ها متفاوت است فلذا لازم با بعضی از متد های رنگ آمیزی آشنا شویم
رنگ آمیزی مثبت :
۱- تهیه گستره و تثبیت آن
۲- چند قطره از رنگ مورد نظر را روی گستره میریزیم
۳- بعد از ۳ تا ۵ دقیقه به ارامی گستره را بشورید و آن را خشک کنید
رنگ های مورد نظر : رنگ های قلیایی مثل متیلن بلو و سافرانین
رنگ آمیزی منفی :
۱- یک قطره رنگ آئوزین را روی لام میریزیم
۲- به کمک یک لوپ حلقوی استریل مقداری از نمونه را بردارید
۳- نمونه را در قطره رنگ روی لام حل کنید
نکته : اگر محیط ما یک محیط مایع بود لوپ را در محیط مایع قرار داده و مستقیما ان را در قطره رنگ بریزید و سپس به کمک یک لام دیگر قطره را روی لام پخش کنید
رنگ آمیزی گرم (gram staning) :
۱- عمل تهیه گستره و تثبیت را انجام دهید
۲- لام را روی تشک رنگ آمیزی ببرید
۳- روی نمونه رنگ کربستالل ویوله بریزید
۴- بعد گذشت یک دقیقه سطح لام را با آب مقطر بشورید
۵- محلول لوگول را روی گستره بریزید
۶- بعد از یک دقیقه سطح لام را با آب مقطر بشورید
۷- روی گستره الکل ۹۵ ٪ بریزید (این مرحله به رنگ بری معروف است)
۸- بعد از ده ثانیه سطح لام را با آب مقطر بشورید
۹- روی گستره سافرانین یا فوشین بریزید
۱۰- بعد از ۳۰ ثانیه سطح لام را با آب مقطر بشورید
نکته : در این رنگ آمیزی قرمز ها گرم منفی هستند و بنفش ها گرم مثبت
رنگ آمیزی اسید فست :
۱- عمل تهیه گسترش و تثبیت را انجام دهید
۲- روی گستره رنگ فوشین بریزید
۳- به مدت پنج دقیقه به لام حرارت میدهیم اما نه در حدی که نجوشد بلکه همین مقدار که بخار بلند شود از آن کافی است
تذکر : در صورتی که رنگ تبخیر شد در طول این مدت میتوان به آن رنگ اضافه کرد
۴- پس از خشک شدن لام آن را با آب مقطر بشورید
۵- روی گستره اسید سولفریک ۱۵٪ بریزید
۶- بعد از ۳۰ ثانیه سطح لام را به کمک آب مقطر میشوریم
۷- روی گستره متیلن بلو بریزید
۸- پس از ۳۰ ثانیه گستره را با آب مقطر بشورید و لام را در مجاورت هوا خشک کنید
روش رنگ آمیزی اسپور به روش مولر :
۱- عمل تهیه گستره و تثبیت را انجام بدهید
۲- به گستره فوشین اضافه کنید و به مدت پنج دقیقه به آن حرارت دهید
۳- گستره را با آب مقطر بشورید
۴- به گستره اتانول اضافه کنید تا رنگ های اضافی برود و بعد از آن با آب مقطر بشورید (یک قرمز کم رنگی میماند)
۵- به مدت یک دقیقه و سی ثانیه روی گستره متیلن بلو بریزید
۶- گستره را با آب مقطر بشورید و صبر کنید تا در مجاورت هوا خشک شود
لطفا درکانال ما عضو شوید برای عضویت کلیک کنید
